ThiolTrace Violet 500 (glutathione detection reagent)

谷胱gan肽檢測(cè)探針

產(chǎn)品信息

產(chǎn)品描述

還原型谷胱gan肽（GSH）的亞細(xì)胞檢測(cè)和定位對(duì)于了解氧化還原態(tài)的調(diào)節(jié)、藥物的作用效應(yīng)以及脫毒機(jī)制方面十分重要。有文獻(xiàn)報(bào)道不同細(xì)胞亞群在應(yīng)對(duì)氧化應(yīng)激時(shí)的GSH水平存在差異，因此，適用于流式細(xì)胞分析和自動(dòng)化熒光檢測(cè)的GSH檢測(cè)探針的開(kāi)發(fā)非常重要。比較于常用的GSH檢測(cè)探針：?jiǎn)武宥罚╩BBr，MX5315）、單氯二胺（mBCl，MX5318），以及Thiotracker™ Violet，ThiolTrace™ Violet 500是一款更明亮和更穩(wěn)定的細(xì)胞內(nèi)硫醇探針（Thiol probe），用于監(jiān)測(cè)胞內(nèi)硫醇。由于GSH代表細(xì)胞內(nèi)的絕大多數(shù)游離硫醇，因此，ThiolTrace™ Violet 500能用來(lái)評(píng)估細(xì)胞內(nèi)GSH的水平。

ThiolTrace™ Violet 500具有以下優(yōu)勢(shì)：

j 比mBCl和其他常用的胞內(nèi)硫醇染料（比如：Thiotracker Violet）至少明亮10×；在含生長(zhǎng)因子的細(xì)胞培養(yǎng)基內(nèi)，ThiolTrace Violet 500比Thiotracker Violet的熒光強(qiáng)度高10-100倍（見(jiàn)附圖I）。

k 能用紫外（UV）或405nm波長(zhǎng)激發(fā)，最大發(fā)射波長(zhǎng)~525nm（見(jiàn)附圖II）。

l 能用醛類固定和0.5% Triton X-100透化。

m 能用于多通路分析，包括細(xì)胞毒性研究。

n 兼容于各種稀釋溶液包括含血清的細(xì)胞培養(yǎng)基。

o 操作簡(jiǎn)單，只需37℃孵育30min即可進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)；

p 適用于多種檢測(cè)方法，包括：流式細(xì)胞術(shù)、HCS成像和落射熒光顯微鏡。

本品以溶于500×的DMSO儲(chǔ)存液形式提供。以MX5322-100T包裝為例，用于熒光顯微鏡檢測(cè)，按照200μl工作液/孔，可以做100個(gè)孔。用于流式分析，按照500μl/次，可以做40次。

保存與運(yùn)輸方法

保存：≤-20℃避光干燥保存，6個(gè)月有效。

運(yùn)輸：冰袋運(yùn)輸。

注意事項(xiàng)

1）   整個(gè)染色過(guò)程中需注意避光。

2）   ThiolTrace™ Violet 500（500× in DMSO）在4℃，冰浴等較低溫度下會(huì)凝固而粘附在離心管官底、管壁或管蓋內(nèi)，可將置于25℃水浴溫育片刻直至全部融解后使用。對(duì)于微量液體，每次使用前低速離心使得液體全部沉降至管底，再開(kāi)蓋使用。

3）   為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。

產(chǎn)品使用

一、試劑準(zhǔn)備

j 于實(shí)驗(yàn)前，將低溫保存的500×儲(chǔ)存液置于室溫回溫至少20min使其完quan融化。

k低速離心3~5min，使其完quan沉淀置管底。

l于超凈臺(tái)內(nèi)開(kāi)蓋取用。初次使用，需根據(jù)單次用量分裝，置于-20℃避光密封干燥保存，避免反復(fù)凍融。

二、工作液準(zhǔn)備

于實(shí)驗(yàn)前，取1μl ThiolTrace Violet 500儲(chǔ)存液（500×）加入500μl生理緩沖液（比如：HBSS、HHBS），充分混勻，即得到所需的染色工作液，染色工作液現(xiàn)配現(xiàn)用；

【注】：也可以用不含血清的細(xì)胞培養(yǎng)基來(lái)配制染色工作液。

三、操作流程（96孔板熒光成像，黑框透明底板）

3.1 如有需要，用待測(cè)化合物處理細(xì)胞（細(xì)胞密度：5×105~1×106細(xì)胞/孔）一段時(shí)間，去除培養(yǎng)基。

【注】：適宜的處理時(shí)間因細(xì)胞類型和細(xì)胞密度的不同而有差異，每次實(shí)驗(yàn)都推薦優(yōu)化處理時(shí)間。

四、操作流程（流式分析）

4.1 如有需要，用待測(cè)化合物處理細(xì)胞（細(xì)胞密度：5×105~1×106細(xì)胞/孔）一段時(shí)間。

【注j】：適宜的處理時(shí)間因細(xì)胞類型和細(xì)胞密度的不同而有差異，每次實(shí)驗(yàn)都推薦優(yōu)化處理時(shí)間。

【注k】：對(duì)于貼壁細(xì)胞，用0.5mM EDTA處理細(xì)胞使其漂浮以維持細(xì)胞完整，染色前用含血清的培養(yǎng)基清洗細(xì)胞一次。

相關(guān)產(chǎn)品

附圖I. ThiolTrace Violet 500與Thiotracker Violet的染色效果圖

圖1. 含細(xì)胞培養(yǎng)基的Jurkat細(xì)胞分別用ThiolTrace Violet 500與Thiotracker Violet標(biāo)記。染色流程：Jurkat細(xì)胞于37℃，5% CO2培養(yǎng)箱中用ThiolTrace Violet 500與Thiotracker Violet孵育20min。用流式細(xì)胞儀（Pacific Orange通道）測(cè)定熒光值。

附圖II. ThiolTrace Violet 500的光譜圖

— —Written/Edited by V. Shallan【版權(quán)歸MKBio懋康所有】

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